外泌体表征与鉴定
根据国际外囊泡协会发布的指导首创《MISEV 2018》, 外泌体特征通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态和Western Blot检测标志蛋白三项鉴定方案来验证
NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度,TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征,Western Blot检测外泌体标志蛋白。
外泌体表征与鉴定
Western Blot蛋白免疫印迹分析
Western blot是通过抗原抗体特异性结合的原理,检测外泌体标志蛋白,从蛋白质层面对外泌体进行鉴定。常用的外泌体标志蛋白包括CD63、CD81、CD9、Flot1、 TSG101及Alix等。
检测方法:ECL化学发光,多功能化学发光凝胶成像分析系统。
样本要求:血浆、细胞上清、唾液、尿液外泌体蛋白量> 10 μg,蛋白浓度>0.2 μg/μL;干冰运输。
外泌体表征与鉴定
NTA 纳米颗粒追踪分析
NTA分析是从整体上对外泌体的颗粒浓度和粒径分布情况进行检测,具有准确、快速、重复性好等优点。
检测仪器:Particle Metrix(ZetaView)
样本要求:避免反复冻融,-80℃保存,干冰运输。
外泌体表征与鉴定
TEM透射电子显微镜观察法
TEM透射电子显微镜电镜是从形态和大小上对外泌体形态结构和大小进行鉴定。
检测仪器:透射电子显微镜(HITACHI,H-7650)
样本要求:NTA颗粒浓度> 10 10 particles/mL,体积> 20 μL;避免反复冻融,-80℃保存,干冰运输。